VIEW ARTICLE    doi:10.1094/ASBCJ-2010-0115-01

Detection of Aflatoxin B1 in Corn, Rice, and Barley by ELISA, Using a Heavy-Chain IgG(2b) Isotype Monoclonal Antibody (1). Shi Chun Pei, College of Life Sciences, Northeast Forestry University, Harbin, and Food College, The HLJ August First Land Reclamation University, Daqing, P.R. China; Yu Hua Li, College of Life Sciences, Northeast Forestry University, Harbin, P.R. China; Yuan Yuan Zhang and Lin Cai, Food College, The HLJ August First Land Reclamation University, Daqing, P.R. China; and Won Jong Lee (2), Department of Food Science, Gangneung-Wonju National University, Gangneung, Korea. (1) This work was presented at the 2009 ASBC Annual Meeting in Tucson, AZ. (2) Corresponding author. E-mail: <wonjlee@gwnu.ac.kr>; Phone: +82-33-640-2332; Fax: 82-33-647-9535. J. Am. Soc. Brew. Chem. 68(1):10-14, 2010.

A rapid and sensitive, indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (IC-ELISA) method has been developed to measure aflatoxin B1 (AFB1) in corn, rice, and barley using a heavy-chain IgG(2b) isotype monoclonal antibody (MAb). One MAb was isolated and characterized after fusion of myeloma cells with spleen cells isolated from BALB/c mice that had been immunized with AFB1 carboxymethyl oxime conjugated with bovine serum albumin. The antibody was IgG(2b) with a lambda light chain. The cross-reactivities of the anti-AFB1 MAb clone were 1.0% against aflatoxin M1 and <1.0% against aflatoxin B2, aflatoxin G1, and deoxynivalenol. The limit of detection for AFB1 was 0.001 ng/mL, and the AFB1 concentration required for 50% inhibition of binding was 0.01 ng/mL. The linear range for the developed IC-ELISA was 0.001–10.0 ng of AFB1 per mL. Assays of cereal extract samples mixed with AFB1 ranging in concentration from 0.1 to 10 ng/mL resulted in a mean ELISA recovery of 93.7%. In total, 53 samples of corn, rice, and barley were collected from farms in northeastern China. The concentration of AFB1 in all samples collected was <1 ng/g. The average AFB1 contamination rates were 66% in corn, 42% in rice, and 58% in barley. The results indicate that necessary precautions will have to be taken to minimize AFB1 contamination in corn, rice, and barley. Keywords: Aflatoxin B1, Barley, Corn, ELISA, Rice

Una rápido y sensible, indirecto competitivo ensayo de inmunoabsorción enzimática (IC-ELISA) ha sido desarrollado para medir la aflatoxina B1 (AFB1) en maíz, arroz, y cebada utilizando la cadena pesada IgG(2b) isotipo de anticuerpos monoclonales (AcM). Una AcM fue aislado y caracterizado después de la fusión de células de mieloma de células de bazo aislado de ratones BALB/c que habían sido inmunizados con la oxima carboximetil AFB1 conjugado con albúmina sérica bovina. El anticuerpo fue IgG(2b) con una lambda cadena ligera. La reactividad cruzada del anti-AFB1 clon de AcM fueron de 1.0% frente a la aflatoxina M1 y <1.0% frente a la aflatoxina B2, la aflatoxina G1, y deoxinivalenol. El límite de detección para AFB1 fue 0.001 ng/mL, y la concentración de AFB1 necesarios para un 50% de inhibición de la unión fue de 0.01 ng/mL. El rango lineal para desarrollados IC-ELISA competitivo indirecto fue 0.001–10.0 ng/mL de aflatoxina B1. Los ensayos de las muestras de extracto de cereales mezclados con AFB1 que van en la concentración de 0.1 a 10 ng/mL como resultado una recuperación de ELISA media de 93.7%. En total, 53 muestras de maíz, arroz y cebada se obtuvieron de las granjas en el noreste de China. La concentración de AFB1 en todas las muestras recogidas fue de <1 ng/g. El promedio de los índices de contaminación de AFB1 fueron de 66% en maíz, 42% en el arroz, y el 58% en la cebada. Los resultados indican que las precauciones necesarias que deben tomarse para minimizar la contaminación de AFB1 en el maíz, el arroz, y la cebada. Palabras claves: Aflatoxina B1, Arroz, Cebada, ELISA, Maíz