VIEW ARTICLE DOI: 10.1094/ASBCJ-59-0028
High-Performance Separation of Unmodified and Reduced Hop and Beer Bitter Compounds by a Single High-Performance Liquid Chromatographic Method. Diedrich Harms (1) and Frank Nitzsche, König Brauerei GmbH & Co. KG, Friedrich-Ebert-Straße 255-263, D-47138 Duisburg, Germany. (1) Corresponding author. Telephone: +49-203-4552249; Fax: +49-203-4552573; E-mail: <D.Harms@koenig.de> J. Am. Soc. Brew. Chem. 59(1):28-31, 2001. Accepted October 16, 2000.
An improved high-performance liquid chromatographic method for the separation of the isoxanthohumol iso-alpha-acids, rho-iso-alpha-acids, tetrahydro-iso-alpha-acids, alpha-acids, and beta-acids in beer is presented. This is the first time a complete separation of all six isomers of iso-alpha-acids has been described. It is done by using an isocratic elution system in beer. A gradient elution method is used for measuring all the main hop-bittering substances such as alpha-acids, beta-acids, iso-alpha-acids, and all reduced compounds in light-stable beer, hop extracts, and wort. A chemically cross-linked "base deactivated" C18 column with a citrate-buffered (pH 7) acetonitrile-methanol gradient mobile phase enables the separation of the beer bitter components within 50 min. The analysis of wort samples was achieved with a tris-buffered (tris(hydroxymethyl)-aminomethane) (pH 7.5) acetonitrile-methanol gradient mobile phase within 60 min. Sample preparation was by preconcentration on SPE C8 cartridges, which gave good reproducibility and separation of bitter components from the beer matrix. Due to the complex matrix of beer and wort, an optimized sample preparation procedure is used to increase the life of the column. Keywords: Bittering compounds, Chiral separation, Sample pretreatment
Separación
de alta resolución
de los compuestos
del lúpulo y
de la cerveza,
reducidos y
sin modificar,
responsables
del sabor amargo
mediante un
único procedimiento
de cromatografía
líquida de altas
prestaciones
Presentamos las mejoras realizadas sobre un método de cromatografía líquida de alta resolución para que permita la separación de los siguientes compuestos de la cerveza: isoxantohumol, iso-alfa-ácidos, rho-alfa-ácidos, tetrahidro-iso-alfa-ácidos, alfa-ácidos y beta-ácidos. Esta es la primera vez que se describe la separación completa de los seis isómeros de los iso-alfa-ácidos. Se consigue sobre muestras de cerveza y empleando un sistema de elución isocrático. El método que eluye utilizando un gradiente se utiliza para la determinación de las principales substancias amargas del lúpulo, tales como los alfa-ácidos, los beta-ácidos, los iso-alfa-ácidos y todos los compuestos reducidos de los mismos, que aparecen en las cervezas que no son alteradas por la luz solar, los extractos de lúpulo y los mostos. La separación de los compuestos amargos de la cerveza se consigue en unos 50 minutos mediante el uso de una columna de C18 químicamente entrelazada y "desactivada por álcali" junto con una fase móvil formada por un gradiente de acetonitrilo y metanol, ambos en tampón citrato (pH 7). El análisis de las muestras de mosto se logra en unos sesenta minutos usando como fase móvil un gradiente de acetonitrilo y metanol, ambos en tampón tris (tris(hidroximetil)-aminometano) (pH 7,5). La preparación de las muestras se realizó por pre-concentración de las mismas sobre cartuchos SPE C8, lo que proporcionaba una adecuada reproducibilidad y separación de los principios amargos de la matriz en la que se encuentran, la cerveza. Debido a la complejidad de matrices tales como el mosto o la cerveza, hacíamos uso de un procedimiento de preparación de muestra optimizado con el objeto de aumentar la vida útil de la columna. Palabras clave: Compuestos amargos, Separación quiral, Pretratamiento de muestra