VIEW ARTICLE DOI: 10.1094/ASBCJ-57-0094
Novel Preliminary Washing Procedure for Industrial Yeast Samples, Used to Hasten the Differentiation of Closely Related Lager Strains Using Polymerase Chain Reaction. Mary Pecar (1), BrewTech Carlton and United Breweries Limited, 1 Bouverie Street, Carlton Melbourne, Victoria, Australia 3053; Kathryn Tonissen, School of Biomolecular and Biomedical Sciences, Faculty of Science, Griffith University, Nathan, Queensland, Australia 4111; and Peter Rogers (1), BrewTech Carlton and United Breweries Limited, Carlton Melbourne, Australia. (1) Corresponding authors. Fax: (61 3) 9347 9240. J. Am. Soc. Brew. Chem. 57(3):94-98, 1999. Accepted April 26, 1999.
A rapid
yeast cell-washing
procedure was
developed using
a solution mix
of 10 mM
ethylene diamine
tetra-acetic
acid and 0.2%
(w/v) sodium
tri-poly phosphate
(EDTA/STPP solution).
This solution
removed inhibitors
of the polymerase
chain reaction
(PCR) that are
usually present
in complex yeast
broths used
for beer production.
This enables
PCR to be performed
on DNA isolated
from yeast cells
growing in wort
fermentation
broths without
an additional
overnight incubation
step in yeast
extract, peptone,
and dextrose
media. This
washing procedure
was found to
be superior
to other previously
described methods.
Parameters of
PCR were further
manipulated
to be able to
differentiate
between closely
related yeast
lager strains.
Keywords: Ale,
PCR, Strain
differentiation,
Wort.
Se
ha desarrollado
un procedimiento
rápido
de lavado de
células
de levadura
utilizando una
disolución
de EDTA/STPP
que elimina
los inhibidores
de la reacción
de PCR que se
encuentran normalmente
presentes en
los complejos
caldos en los
que se cultiva
la levadura
para la producción
de cerveza.
Este procedimiento
permite que
las reacciones
de PCR se lleven
a cabo con ADN
purificado a
partir de células
de levadura
creciendo en
el mosto durante
la fermentación,
sin la necesidad
de tener que
recurrir a una
etapa adicional
de incubación
en medio YPD
durante una
noche. Hemos
encontrado que
este procedimiento
de lavado es
mejor que otros
métodos
previamente
descritos. Además,
hemos alterado
los parámetros
de la reacción
de PCR para
poder diferenciar
entre cepas
de levadura
de fermentación
baja estrechamente
relacionadas
entre sí.